Elecrophorèse

Réaliser une électrophorèse sur gel d'agarose

Matériel :

- Cuve à électrophorèse

- 1 gel d’agarose

- Papier absorbant

- Gel d’agarose (1 pour 4 binômes)

- Bain de tampon (tris-glycérine, pH = 8,3)

- Pinces, gants, lunettes

- Sérums de contrôle HbA, HbS (Témoins)

- Sérums des membres de la famille : Grand-Père, Grand-Mère, Père, Mère, Enfant à naître (Tests)

- Micropipettes de 20 ou 50 μL

Protocole :

1 Déposer 10 μL de chaque échantillon dans chaque puit du gel d’agarose

2 Une fois tous les échantillons déposés, fermer le couvercle de la cuve et la brancher au générateur.

ATTENTION : ne pas trop attendre pour lancer la migration car il faut éviter que les protéines diffusent dans le gel.

3 Lancer la migration à 70V pendant 15min (à surveiller de temps en temps).

ATTENTION : vérifiez que tout migre bien en vous assurant de l’apparition d’une condensation sous le couvercle 5min environ après l’allumage de l’appareil.

Durant ce temps d’attente, tout en surveillant, commencer votre compte rendu :

Com : préparer une présentation des résultats en évitant le texte
Rai : interprétation des résultats et en déduire le génotype de II4 et III2

4. Au bout de 15min, déconnectez l’alimentation avant d’ouvrir la cuve après la migration. Les bandes peuvent alors être observées et photographiées.

Manipuler avec la micropipette comme un pro

* Pour mettre et enlever un cône : on ne touche PAS le matériel avec ses doigts. On appuie sur le bouton d’éjection du cône ou on enfonce le bout de la micropipette sur le cône pour l’enfiler.

==> Les cônes sont jetés dans un bac contenant de la javel pour éviter toute contamination protéique.

* Pour régler un volume exact d’une solution : on tourne la molette de la micropipette. On vérifie avant chaque prélèvement que la valeur n’ait pas été malencontreusement modifié.

* Pour manier CORRECTEMENT la micropipette :

En plongeant le cône dans la solution de prélèvement, le bouton pression doit être enfoncé jusqu’au PREMIER cran de la micropipette avant d’entrer dans la solution (on ne fait pas de bulles d’air dans la solution !)
Pour prélever la solution, on relâche simplement la pression exercée sur le bouton.
Pour déposer la totalité du volume de solution prélevé, on appuie sur le bouton pression jusqu’au DEUXIEME cran (maximum de la pression). A cette occasion, l’extrémité du cône est soit plongé dans la solution tampon contenue dans le puit d’un gel de dépôt, soit plaqué contre la paroi d’un tube Ependorf sans toucher une autre solution déjà présente.